中文版 ENGLISH
首页     公司简介     新闻     在线商城     分析测试     电镜耗材     制样设备     资料下载     电镜室   微观世界     电镜人物     电镜学会     电镜学报     联系我们
热门关键词方孔铜网  圆孔铜网  二甲胂酸缓  培养皿  切薄用具 钨灯丝  镊子
A0-分析测试表征
A1-电镜载网系列-方孔载网
A2-电镜载网系列-圆孔载网
A3-电镜载网系列-环形载网
A4-电镜载网系列-特型载网
B1-电镜支持膜系列-特殊膜产品
B2-电镜支持膜系列-碳膜产品
B3-电镜支持膜系列-孔膜产品
B4-电镜支持膜系列-纯碳膜产品
B5-基底材料
C-电镜校正标准样品
D-样品存取工具
E-电镜专用镊子及工具
F-电镜导电粘接用品
G-电镜生物制样用品
H-电镜材料制样用品
I-电镜暗室处理用品
J-真空溅射蒸镀用品
K-电镜清洁保养用品
L-实验常用工具
M-实验常用设备
N-电镜方面图书
O-电镜灯丝及其它零配件
P-热销设备
Z-电子工具
新品上市
 
资料下载
常用包埋剂及配方
 常用包埋剂及配方
       目前在电镜技术上使用的包埋剂种类颇多,但普遍使用的是环氧树脂,在免疫和细胞化学技术中还会使用到丙烯酸树脂。
环氧树脂(epoxy resin) group
       环氧树脂是一类具有末端环氧基的甘油多聚酯。它的分子中有两种反应基团,即环氧基团(epoxide group)和氢氧基团(hydroxyl group)。其末端基团易与含有活性氢原子的化合物如胺类(如DMP-30,DMAE,乙二胺等,又称催化剂或加速剂)反应,使单体首尾相连接形成长链聚合物。此外,在单体中的氢氧基团能与有机酸酐(如MNA,DDSA,九烷基琥珀酸酐,NSA等,又称硬化剂或固化剂)结合,使单体分子形成横桥。所以,环氧树脂以单体渗入细胞组织,而这种单体在一定的温度条件下,在硬化剂和加速剂作用下,就形成一个非常耐溶剂和耐化学腐蚀的交链稳定的三维空间聚合体。为了改善聚合体(包埋块)的切割性能,还会在环氧树脂包埋配方中加入增塑剂,以调节包埋块的韧性。
        环氧树脂包埋剂对细胞微细结构有较好的保存性能,聚合后体积缩小较少,而且在真空中能经受较长时间的轰击。但它的操作不太方便,反差较弱。环氧树脂的型号较多,常用Epon812(SPON812代替),Spurr树脂(ERL-4206)等,现介绍最常用的两种环氧树脂
Epon812包埋剂
Epon812是一种进口树脂,它是一种长链的脂肪族环氧化合物,粘度为150-210cP。该包埋剂的配制方法甚多,但一般都按1961年Luft提出的配方进行。其配方如下:
Epon812(A液) 62ml
DDSA 100ml
DMP-30(B液)100ml
MNA 89ml
上述配方若改变A液和B液的比例则可调节聚合块硬度,A液多则软,B液多则硬。通常冬天使用A:B=2:8;夏天使用A:B=1:9,可视组织的硬度和气候不同选择其比例。配制时可先分别配制A液和B液,然后将A液和B液按一定比例混合后,再加入1%-2%的加速剂,边加边搅拌,使其充分混合。为了方便操作,也有人将Epon812,DDSA,MNA三种成分按一定比例直接混合使用。Epon812的聚合温度为:37℃过夜,60℃24-36小时。
根据南方地区的气候条件,可用下列配方:
Epon812 51ml
DDSA 12ml
MNA 37ml
DMP-30 1.8-2ml
聚合条件 室温过夜,60℃ 8-12h
       DDSA是十二烷基琥珀酸酐(Dodecenylsuccinic anhydride)的简称。它是一种可得到软性包埋块的长链脂肪族分子。
       MNA是甲基内次甲基二甲酸酐(Methyl Nadic anhydride)的简称,又称六甲酸酐,它有两个链环,能获得较硬的包埋块。
       DMP-30是2,4,6-三(二甲基氨基甲基)苯酚(2,4,6-Tri(dimethylaminomethyl)phenol)的简称。它能加速固化过程。
       现在SPON 812成为其直接的替代品。后者以它略低的黏度明显地让至少某些样品更加容易滤渗。SPON 812替代”套装用作原始的“Epon 812”的一个直接替代品。用户报告(除了已经被提到的)了其在切分, 染色, 或在电子束稳定方面完全没有区别。除了用SPON 812 代替Epon 812,一切都如出一辙。在用于可溶解在树脂单体中的样品(即样品能被单体溶解或能与单体结合)时,SPON 812 可能是更受青睐的"Epon 替补" 树脂。
        显微镜专家通常面对的难题之一就是在最后的块体中树脂的粘度与硬度之间做出取舍。通过加入过量的硬化剂, 你可以从SPON 812做出象任何树脂一样坚硬或比很多树脂还要硬的块体。但在这样情况下聚合会导致更高粘度的树脂,因此潜在地减少了滤渗的有效性。但我们依然推荐以此为开端因为其他的选择更加昂贵,使用也更加复杂。为了使埋置的粘度降低, 我们建议使用低酸GMA水溶性TEM 配方。GMA单体的粘度略微比水低。
Spurr树脂(ERL-4206包埋剂)
         这是1969年由Spurr推荐使用的包埋剂,所以也称Spurr树脂。它含有两个环氧基,是一种低粘度的环氧树脂。由于具有粘度低的特点,所以近年来一些实验室已开始使用它。其配方可按下表中各种成分的比例,即可获得不同性能的包埋块。其配方如下:
Spurr树脂包埋剂配方 成分(g) 标准硬度     硬      软        快速聚合配方       缓慢聚合配方 
                             ERL-4206    10.0      10.0  10.0          10.0                 10.0
                            DER-736        6.0        4.0    7.0            6.0                   6.0 
                                 NSA         26.0      26.0  26.0          26.0                 26.0
                                DMAE        0.4         0.4    0.4            1.0                   0.2  
                     聚合时间70℃(h) 8             8       8              3                      16 
                       混合时间(天)     3-4        3-4    3-4             2                       7
           ERL-4206是二氧化乙烯环己烯(vinylcyclohexene dioxide)的简称。它的分子小,粘度低,聚合块硬度大。ERL 4206是使用广泛的超低粘度套装的组成成分,但现在已经不再生产了,目前国际上普遍将ERL4221作为其插件式替代品。测试显示,如果不说明的话,只要适当改变配方以解决两者性质上存在的区别,大多数用户发现不了有什么不同。改良(ERL 4221)嵌入配方如下表所示:
标准(坚固的)块组成中的Spurr成分重量(克)
成分
重量,g
ERL 4221
20
DER 736
16
NSA
50
DMAE
0.6
混合使用ERL 4221配方的成分:
制备(坚固的)标准配方程序
树脂成分的制备和混合必须充分,并一直在通风橱中进行。
  1. 称一次性塑胶烧杯皮重,加入86.6 g到横梁(使用的成分总重量)。
  2. 往烧杯中缓慢倒入50 g NSA,用抹刀或搅拌棒加入最后几滴。
  3. 用一次性注射器往烧杯中加入20 g ERL 4221。
  4. 用一次性注射器往烧杯中加入16 g DER 736。
  5. 最后,往烧杯中加入0.6 g DMAE,从天平上移开,立即搅拌约3分钟。
  6. 将烧杯置于干燥器中。这将使混合物自己释放出气泡,更充分混合。
  7. 如果时间间隔缩短,将混合物轮流在真空与空气中放置,直到消除气泡。
  8. 由于使用期限长(3-4天),混合物可在使用前一天制备。
          如果要大量制备,按照上述的方式(步骤1-7)将成分称入长颈瓶中,然后塞住,并在适当的间隔用力摇动长颈瓶,直到完全混合。 混合的嵌入介质可以冷藏数月之久,在有封口的一次性注射器中储存以防止湿气,然后将一次性注射器放入标有硅胶的密封容器中。
          DER-736是diglycidyl ether of a polypropylene glycol的简称。它属于脂肪族,分子小,有低粘度性质,可调节包埋块的硬度。
          NSA是nonenylsuccinic anhydride的简称。它是一种特殊的硬化剂,应避免暴露在潮湿的大气中,以防环氧或酐链的水解作用。
          DMAE是dimethylaminoethanol的简称。它是催化剂,增加催化剂的比例,可以缩短聚合的时间。
          Spurr树脂最终硬度可用DER-736的量来调节。配制时,先把前三种成分混合后,最后才加入DMAE,但从开始到混合完成,达到淡黄色状态需3-7天。用陈旧的包埋剂时,则聚合时间会减少。因Spurr树脂嗜氧,聚合时不要加盖。包埋剂最好是用新鲜配制,但为了方便,可预先配制好保存在低温和防潮的环境中。Spurr树脂与Epon812树脂相比粘度低,操作方便,但毒性比Epon812树脂大,所以操作时要更加小心,此外,Spurr树脂各成分间的分子量大小差异较大,在组织中的渗透速度不一,容易个别成分造成渗透不均,而导致局部聚合不完全,染色效果不佳。
丙烯酸树脂(acrylic resin)
           丙烯酸树脂无色透明的,由丙烯酸衍生物聚合而成。丙烯酸单体粘度低,可以在低温下渗透及聚合,因而能满足免疫和细胞化学技术低温操作的要求。其聚合方式有两种,热聚合和紫外线照射聚合。但它对脂类等成分的抽提比环氧树脂严重,为此它也需要在较低的温度下使用才可能减少抽提作用。此外,聚合前后丙烯酸树脂的体积变化较环氧树脂大(体积大约收缩10-20%),并且它在电子束的照射下稳定性比环氧树脂低,放热的聚合过程可引起组织细胞结构的损伤,致敏性也比环氧树脂强,使用时要小心防护。一般来说,除了免疫和细胞化学技术外,超微结构的研究并不推荐使用它。在电镜中使用较多的丙烯酸树脂有伦敦白胶(LR White)和Lowicryl系列的树脂。
伦敦白胶(LR White)
           伦敦白胶含有7种不同的丙烯酸单体和2种增塑剂,引发剂是BPO(dibenzoyl peroxide),加速剂为N,N-dimethyl paratoluidine,但具体的配方和成分没有报道。它的粘度低,渗透能力强,可用于较大的组织块或致密的组织,由于它有一定的亲水性,方便水性染料进入,染色效果佳,使用非常方便,通常买回来的是已经混合好的试剂,它的有效期仅为12个月。伦敦白胶可以微溶于水,因而可以采用部分脱水方案,但不能使用丙酮作为脱水剂。氧气会抑制聚合反应的进行,因而聚合时要在模块中注满包埋剂并盖紧盖子。为了方便运输和储存,也有未加BPO的伦敦白胶(uncatalysed LR White)出售,这种试剂需要加入催化剂(9.9g催化剂/500gLR White)充分搅拌并室温放置24小时以上才能使用。
Lowicryl系列包埋剂
            Lowicryl系列包埋剂是专为低温包埋设计的包埋剂。它有两种类型:一种是极性树脂,K4M和K11M;另一种是非极性树脂,HM20和HM23。极性树脂亲水,使样品保存在一个水性的环境中从而较少蛋白质变性,且染色的效果较好。而非极性树脂的切割性能比较好。两种树脂通常都在隔绝氧气的情况下低温紫外线照射聚合。Lowicryl系列包埋剂全部以试剂盒的形式出售,有详细的说明书提供参考。
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                         

emcn.com.cn Copyright(C)2006-2010,All Rights Reserved 京ICP备13015037号-1
版权所有,未经书面授权,所有页面内容不得以任何形式进行复制 本网由北京中镜科仪技术有限公司建设各地方电镜学会提供信息
电话: 010-62559621/62557172 传真:010-62652902 值班电话: 15810848484 地址:北京市海淀区中关村北二条13号中科科仪院内2号楼506室 邮编:100190

在线商城